Cellrangerバーコード分析用の参照CSV ファイルを作成する方法
feature reference CSV は –feature-ref フラグを使用して cellranger count に渡され、実験で使用されるFeature Barcode reagentsのセットを宣言します。
このファイルは、使用される固有のFeature Barcodeごとに、フィーチャー名と識別子、この試薬に関連付けられた固有のFeature barcodeシーケンス、および読み取りシーケンスからFeature barcodeシーケンスを抽出する方法を示すパターンを宣言します。
Feature reference CSV ファイルの必須列
列名 | 説明 |
ID | この機能の一意の ID。 空白文字、引用符、カンマ文字を含めることはできません。 各 ID は一意である必要があり、トランスクリプトームの遺伝子識別子と競合してはなりません。 |
name | この機能の人間が判読できる名前。 空白を含めることはできません。 この名前はルーペブラウザに表示されます。 |
read | どの RNA シーケンスリードにフィーチャーバーコードシーケンスが含まれるかを指定します。 R1 または R2 である必要があります。 注: ほとんどの場合、R2 が正しい読み取り値です。 |
pattern | 読み取りからフィーチャ バーコード シーケンスを抽出する方法を指定します。 詳細については、以下の「バーコード抽出パターン」セクションを参照してください。 |
sequence | この機能に関連付けられたヌクレオチド バーコード シーケンス。例: 抗体バーコードまたは sgRNA プロトスペーサー配列。 |
例: 抗体キャプチャ バーコードの有効なFeature reference CSV ファイルは、次の表のようになります。
id | name | read | pattern | sequence | feature_type |
CD3 | CD3_TotalSeqB | R2 | 5PNNNNNNNNNN(BC)NNNNNNNNN | AACAAGACCCTTGAG | Antibody Capture |
CD4 | CD4_TotalSeqB | R2 | 5PNNNNNNNNNN(BC)NNNNNNNNN | TACCCGTAATAGCGT | Antibody Capture |
CD8a | CD8a_TotalSeqB | R2 | 5PNNNNNNNNNN(BC)NNNNNNNNN | ATTGGCACTCAGATG | Antibody Capture |
CD14 | CD14_TotalSeqB | R2 | 5PNNNNNNNNNN(BC)NNNNNNNNN | GAAAGTCAAAGCACT | Antibody Capture |
CD15 | CD15_TotalSeqB | R2 | 5PNNNNNNNNNN(BC)NNNNNNNNN | ACGAATCAATCTGTG | Antibody Capture |
CD16 | CD16_TotalSeqB | R2 | 5PNNNNNNNNNN(BC)NNNNNNNNN | GTCTTTGTCAGTGCA | Antibody Capture |
CD56 | CD56_TotalSeqB | R2 | 5PNNNNNNNNNN(BC)NNNNNNNNN | GTTGTCCGACAATAC | Antibody Capture |
CD19 | CD19_TotalSeqB | R2 | 5PNNNNNNNNNN(BC)NNNNNNNNN | TCAACGCTTGGCTAG | Antibody Capture |
CD25 | CD25_TotalSeqB | R2 | 5PNNNNNNNNNN(BC)NNNNNNNNN | GTGCATTCAACAGTA | Antibody Capture |
CD45RA | CD45RA_TotalSeqB | R2 | 5PNNNNNNNNNN(BC)NNNNNNNNN | GATGAGAACAGGTTT | Antibody Capture |
CD45RO | CD45RO_TotalSeqB | R2 | 5PNNNNNNNNNN(BC)NNNNNNNNN | TGCATGTCATCGGTG | Antibody Captur |
Feature reference CSV ファイルの作成の詳細については、以下のリンクも参照ください。https://support.10xgenomics.com/single-cell-gene-expression/software/pipelines/latest/using/feature-bc-analysis#feature-ref